作为新一代RNA原位杂交技术的代表，美国Bio-Techne旗下的Advanced Cell Diagnostics（ACD）品牌研发的RNA原位杂交检测技术，包括RNAscope，Basescope，miRNAscope已涵盖了对所有RNA（长度大于300nt的长链RNA、50-300nt的RNA片段、外显子跳跃的RNA、环状RNA、以及17-50nt的小RNA，例如miRNA、siRNA、ASO等）的原位检测。

在肿瘤、神经、代谢等领域，非编码小RNA作为一类调节性RNA分子，越来越多受到研究人员的关注，它们在一些疾病的发生发展过程中可能具有关键性作用。同时，由于小RNA分子作为一类基因表达调节性因子，在基因治疗领域也具有很大潜力。针对于miRNA、siRNA、ASO等这类分子的原位检测，可以使用miRNAscope实现，但同时检测调节性分子以及被调节的靶标RNA分子表达变化，也具有非常广泛的需求。为此，ACD日前推出了RNAscope Plus技术，将对小RNA的检测和mRNA的检测结合起来，可以实现同一张切片上同时对1个miRNA/siRNA/ASO和最多3个mRNA分子进行荧光检测。

RNAscope Plus结合了miRNAscope和RNAscope分别的探针设计以及信号放大系统，可对已有的小RNA及mRNA探针兼容。对mRNA检测部分依旧采用“双Z型探针“及信号放大，增加小RNA分子检测后，不影响mRNA的信号。对小RNA的检测，采用链状探针及信号放大，可针对siRNA、ASO序列进行个性化探针设计。成像后依旧可利用分析软件对mRNA信号进行定量分析。

得益于ACD专利的探针设计及信号放大技术，小RNA分子及mRNA分子的信号最终都可获得高信噪比。下图展示在细胞片中对miR-205和3个mRNA的阳性对照探针及阴性对照探针的检测。阳性对照中各个通道上的信号点清晰，阴性对照中全片非常干净，体现出方法的高特异性。

在小鼠脑组织切片的检测中，也可获得理想的结果。SNORD85可在小鼠脑某些细胞中特异性表达，下图中除了对SNORD85进行检测外，也对小鼠的神经元（Rbfox3）、星形胶质细胞（GFAP）、小胶质细胞（Aif1）同时进行检测，可见不同靶标特异的定位特征。

针对同一个miR-205分子，对比使用RNAscope Plus的荧光信号与使用可见光试剂盒miRNAscope的可见光红染信号，二者对于miR-205不同表达丰度的细胞中小RNA分子的检出结果有较高的一致性，证明不同的显色方式对于靶标的检测没有影响。

RNAscope技术是由Bio-Techne旗下Advanced Cell Diagnostics (ACD)品牌研发的RNA原位杂交产品，在近年来的生物检测领域发展迅速。与传统的RNA原位杂交相比，RNAscope技术属于新一代RNA原位杂交技术，其特异性的双Z探针设计避免了传统长链RNA探针的弊端，配以自身级联放大检测原理，可以高效敏感地检测到目标RNA。该方法的具体优势如下：

应用广泛

使用RNAscope技术，靶点RNA为大于等于300个碱基的特异序列，即可进行探针设计。因而RNAscope技术可以应用于几乎所有物种，所有组织以及所有基因的检测。

特异性强

RNAscope独特的双Z（ZZ） 探针设计有效的防止了探针的非特异性结合，同时降低了背景干扰。由于结合在非特异性位点的单个的Z 探针不会产生完整的信号放大分子结合位点，并会在杂交过程中被洗脱掉，从而防止非特异性信号的放大，使得探针的信号具有高度特异性。探针设计合成需要2~4周时间即可完成。

灵敏度高

RNAscope方法检测每个RNA 分子时，只需三对双Z（ZZ）探针即可完成杂交和信号的可视化。

单分子可视化和单细胞定量

使用RNAscope技术杂交上三对及以上双Z 探针即可在标准的显微镜下呈现可观察到的点状信号。ACD公司提供的分析软件更可以定量每一个单细胞内RNA 的表达水平。

兼容降解的RNA

由于RNAscope三对双Z探针即可检测到目标RNA，而通常针对靶点RNA设计的探针为20对双Z 探针，因而即使目标RNA发生部分降解，仍可以稳定有效地检测到靶点RNA。

检测结果稳定一致性

RNAscope技术用到的探针以及所有检测试剂全部由工业化合成，且该技术针对不同样本类型（冰冻切片， 石蜡切片，悬浮细胞，贴壁细胞等）已经有成熟的实验操作流程，故使得RNAscope技术检测结果具有稳定性和一致性。除了可以在实验室进行手工操作外，该产品也可以在Leica以及罗氏Ventana自动平台上运行，为结果的一致性和稳定性提供了可靠的依据。

多通道多靶点同时检测

由于RNAscope技术可以同时进行多通道探针杂交以及信号放大，故在可见光检测中可以在同一张切片上同时检测两个靶点；而在荧光检测过程中，可以在同一张切片上检测三个或三个以上靶点RNA。

在RNAscope技术的基础上，ACD品牌旗下的Basescope技术可以检测RNA水平的外显子跳跃，点突变，环状RNA等；miRNAscope可以原位对小RNA，包括miRNA, siRNA, ASO进行追踪定位；而近年来推出的RNAscope HiPlex技术则可以在一张石蜡切片上同时检测最多12个RNA靶标的分布定位，成为神经科学，肿瘤微环境研究以及单细胞测序后验证等领域的常用检测方法。